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Elisa试剂盒的操作原理

Elisa试剂盒的操作原理:ELISA是以**学反应为基础,将抗原的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
ELISA的操作步骤:样品收集保存、试剂准备、温育、洗板、显色、比色、包被、加样、加酶标抗体、终止反应、结果判定、 影响因素:
分子量、稳定性、纯化、包被浓度,抗体纯度和产品质量尽管ELISA测定的操作步骤非常简单,但有可能会影响测定结果的因素却较多,分布在测定操作的各步之中,尤以加样、温育和洗板为甚。为帮助大家分析查找测定中出现问题的可能原因,特对常见问题及原因归纳总结于下表。
临床ELISA测定中可能会出现的问题及可能的原因问题可能的原因(非试剂盒本身的原因)
1.弱阳性质控样本检测不出温育的时间或温度不够;显色反应时间太短;所用配制缓冲液的蒸馏水有问题
2.测定的重复性差(相同样本两次测定结果不一致)这是典型的由测定操作引起的问题,包括(1)加样本及试剂量不准;孔间不一致;(2)加样过快,孔间发生污染;(3)加错样本;(4)加样本及试剂时,加在孔壁上部非包被区;(5)不同批号试剂盒中组分混用;(6)温育时间、洗板、显色时间不一致;(7)孔内污染杂物;(8)酶标仪滤光片不正确;(9)血清标本未完全凝固即加入,反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞,易出现假阳性反应等。
3.白板(阳性对照不显色)(1)漏加酶结合物;(2)洗板液配制中出现问题,如量筒不干净,含酶抑制物(如叠氮钠)等。(3)漏加显色剂A或B;(4)终止剂当显色剂使用。
4.全部板孔均有显色(1)洗板不干净;(2)显色液变质;(3)加底物的吸光受酶污染;(4)洗板液受酶等污染。 关键参数和功能幅度,相应的性价关系
对于食品检测ELISA试剂盒来说,国产的试剂盒在中国市场上比进口的试剂盒占的份额要大,进口的食品检测ELISA试剂盒主要是在通用性试剂盒上面,国产的PCR试剂盒是在检测各种天然**上面。
一般性食品检测ELISA试剂盒的操作比较简单,不需要生产商去上门指导,而且实验的**率也大。食品检测ELISA试剂盒试剂已经成熟,稳定性好,在食品领域中的应用还在扩大;一般在试剂盒出现问题的试剂,只要提供实验报告和以及残留试剂,经厂家鉴定确实属于试剂本身问题的,可以提供退换货服务。
酶免试剂盒要低温运输,(2-8摄氏度),长期保存要在-20摄氏度分装保存(防止反复冻融影响酶的活性),长期保存做好在2-8摄氏度 。
 
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